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高通量測序平臺
環(huán)介鏈接擴增技術(shù)RingCap?(Ring-Link Capture Library technology)系飛朔生物自主研發(fā)專(zhuān)利技術(shù)(專(zhuān)利號:ZL 2015 1 0496049.5),是一種基于多重PCR 的靶向測序文庫制備技術(shù),克服了長(cháng)期困擾著(zhù)基于PCR技術(shù)的靶向文庫制備中的許多限制,如槽糕的序列均一性,丟失的靶標序列,繁復的實(shí)驗流程,冗長(cháng)的人工操作時(shí)間,以及高昂的前期設備投入。
RingCap?能夠實(shí)現一步進(jìn)行高通量測序文庫的構建,具體步驟如下:
v 針對若干目的基因分別設計若干對基本擴增引物,實(shí)現對靶序列進(jìn)行擴增捕獲;
v 設計一對不對稱(chēng)連接探針,該探針中含有一段不與人類(lèi)基因組形成互補的特異性序列,通過(guò)不對稱(chēng)連接探針與上述捕獲到的靶序列特異性連接,形成環(huán)形產(chǎn)物;
v 設計一不與人類(lèi)基因組形成互補的通用引物,特異性的擴增上述環(huán)形產(chǎn)物中的互補序列;
v 將擴增產(chǎn)物純化后,即得所述高通量測序文庫。
技術(shù)平臺 | RingCap?技術(shù)平臺 | VS | 其它常用文庫構建平臺 |
操作步驟 | 二步 | 8-17步 | |
操作時(shí)間 | 3.5小時(shí) | 8-24小時(shí) | |
人工操作時(shí)間 | 45分鐘 | 4-8小時(shí) | |
檢測樣本量 | 5-20ngDNA或RNA | 1-100ng DNA或RNA |
RingCap?技術(shù)流程圖
——僅供科研使用——